反應性腦脊髓炎(EAE)動物模型

反應性腦脊髓炎動物的癥狀、病理改變及免疫學特征與人類的脫髓鞘疾病如：多發(fā)性硬化癥(multiple sclerosis, MS)、急性播散性腦脊髓炎相似，常被看作是這類疾病的動物模型。Rivers等于1933年采用多次肌肉注射兔腦提取物的方法，次成功建立了反應腦脊髓炎(experimental allergic encephalomyelitis, EAE)模型。隨后 Morgan和Kabat又把福氏佐劑(Freund adjuvant, FA)引入到EAE的建立過程中，即把抗原與福氏佐劑混合制成乳劑，單次免疫即可成功誘發(fā)EAE。這不但簡化了EAE的建立過程，而且地提高了模型的可靠性。為研究MS的發(fā)病機制、治療和預防復發(fā)創(chuàng)造了有利的條件。

反應性腦脊髓炎動物模型(Model of allergic encephalomyelitis in rats)

(1)復制方法  Wistar大鼠，體重為200～220g。新鮮牛脊髓60g(也可取新鮮羊腦白質(zhì)200g)，去除筋膜和血管，剪碎，加入適量預冷的氯丨仿；甲醇(2：1)溶液，高速組織分散器勻漿后加氯丨仿；甲醇(2：1)溶液至620ml，4℃冰箱電動攪拌12h，用布氏漏斗加濾紙抽濾，在未抽干前加310m舍離斷仿；甲醇(2：1)溶液電動攪拌2h，抽濾，如此抽濾2次。沉渣加310ml -20℃預冷丙酮攪拌2h，抽濾2次。沉渣加入620ml雙蒸餾水中，電動攪拌12h，抽濾兩次，沉渣溶于100ml雙蒸餾水中，0.5mol/L HCl調(diào)pH至3.0，冰箱中攪拌1h，4℃1500r/min，離心60min，取上清液置透析袋中過夜。以考馬斯亮藍法測定髓鞘堿性蛋白(MBP)含量為3.2g/L，用真空冷凍干燥機將MBP的粗提品干燥，得粗品 MBP(約75mg)。

用鮑金氏培養(yǎng)基35℃溫箱培養(yǎng)百日咳桿菌，5d后收集菌落，菌液58℃水浴40min滅活細菌，用比濁管比濁法測得百日咳桿菌濃度為60×10的12次方/L。MBP粗提品溶于3ml生理鹽水中與3ml福氏佐劑(卡介苗含量33mg)混合成油包水乳劑，大鼠于雙后足墊皮內(nèi)分別注射0.3ml油包水乳劑和0.1ml百日咳桿菌。注射當天定為0d，每日稱重并觀察動物的神經(jīng)癥狀。EAE的嚴重程度依據(jù)Knono等的標準評定。根據(jù)實驗進程需要分別取不同病變時期的實驗的鼠腦和脊髓組織，用10％的甲醛固定，石蠟包埋，切片，HE染色。

(2)模型特點  實驗組大鼠注射抗原后精神萎靡、食欲減退、體重逐漸下降。部分動物自第8日開始出現(xiàn)EAE明顯癥狀：尾部張力下降，繼而尾部張力消失。繼尾部張力消失后出現(xiàn)單側后肢及雙側后肢無力，繼而單側及雙側后肢癱瘓，人為翻身后不能恢復姿態(tài)，嚴重者四肢癱瘓，個別動物因丨病情嚴重而死亡。動物發(fā)病的高峰期為注射抗原后10～15d，表現(xiàn)為一次性急性發(fā)病過程，嚴重者四肢癱瘓、死亡。組織學檢查光鏡下可見，EAE大鼠的腦和脊髓組織中有大量炎性細胞浸潤，炎性細胞聚集在血管周圍呈現(xiàn)袖套樣改變。存活者癥狀可逐漸緩解，體重逐漸恢復，約在注射抗原30d后可恢復。

(3)比較醫(yī)學  作為MS的動物模型，EAE為MS發(fā)病機制的研究提供了便利條件。有些動物模型因丨病情嚴重而死亡。此模型發(fā)病率高且病情嚴重的原因可能有以下兩方面：一是抗原MBP用量大(3mg/只)。MBP為誘發(fā)EAE的主要抗原物質(zhì)，研究表明，MBP可激活體內(nèi)Th1+細胞，使之穿過血腦屏障，攻擊自身神經(jīng)髓鞘的MBP，從而導致神經(jīng)細胞脫髓鞘，引起 EAE或MS；二是采用新培養(yǎng)的百日咳桿菌效果好于成品的百日咳疫苗。百日咳桿菌的毒素可增加血管的通透性，使致敏的T細胞易于通過血腦屏障攻擊神經(jīng)髓鞘。該模型利用易獲得的牛脊髓MBP的粗提品，誘導的大鼠EAE模型，發(fā)病率高，病情典型，為MS的研究提供了一個良好的模型。